凍存管使用中常見的五大誤區(qū)與解決方案

 

　　誤區(qū)一：忽視凍存管材質(zhì)適配性，盲目選用。部分使用者為節(jié)省成本，隨意選用普通塑料，未根據(jù)儲(chǔ)存溫度（如-80℃超低溫、液氮?dú)庀?液相）選擇適配材質(zhì)。普通塑料在超低溫下易脆裂，液氮液相環(huán)境中還可能因材質(zhì)滲透性導(dǎo)致樣本污染。解決方案：優(yōu)先選用聚丙烯（PP）材質(zhì)，其耐低溫性強(qiáng)、化學(xué)穩(wěn)定性好，適配-80℃至液氮環(huán)境；液氮液相儲(chǔ)存需選擇標(biāo)注“液氮兼容”的專用凍存管，避免使用聚苯乙烯（PS）等不耐低溫材質(zhì)。同時(shí)，根據(jù)樣本類型（細(xì)胞、血清、核酸等）選擇帶內(nèi)旋蓋、無菌無酶的型號(hào)，減少樣本交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。

 

　　誤區(qū)二：樣本裝載量不當(dāng)，影響凍存效果。常見兩種：一是裝載過滿，凍存時(shí)樣本膨脹導(dǎo)致管蓋頂開、泄漏；二是裝載過少，管內(nèi)空隙過大，樣本與空氣接觸面積增加，易發(fā)生氧化損傷，且復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)溫度不均。解決方案：嚴(yán)格控制裝載量，一般為容積的70%-80%。該比例既能容納樣本凍存時(shí)的體積膨脹（約10%），又能減少管內(nèi)空氣殘留，兼顧安全性和樣本活性。對(duì)于珍貴樣本，可搭配凍存管內(nèi)托使用，避免樣本在儲(chǔ)存過程中晃動(dòng)造成損傷。

 

　　誤區(qū)三：密封操作不規(guī)范，導(dǎo)致樣本污染或泄漏。未擰緊管蓋、未使用密封墊，或擰緊時(shí)用力過猛損壞螺紋，均會(huì)導(dǎo)致低溫環(huán)境下管內(nèi)樣本泄漏、外界污染物侵入，尤其在液氮儲(chǔ)存中，液氮滲入管內(nèi)解凍時(shí)易引發(fā)爆炸風(fēng)險(xiǎn)。解決方案：密封前檢查管蓋螺紋和密封墊是否完好，無破損、變形情況；采用“手?jǐn)Q到位+輕微加固”的方式密封，避免用力過度損壞螺紋；對(duì)于高價(jià)值或易揮發(fā)樣本，可在管蓋外側(cè)纏繞parafilm膜進(jìn)一步密封，雙重保障密封性。

 

　　誤區(qū)四：凍融過程急速升溫/降溫，破壞樣本活性。凍存時(shí)直接將樣本放入-80℃冰箱或液氮，復(fù)蘇時(shí)室溫放置或高溫水浴，溫度驟變會(huì)導(dǎo)致樣本內(nèi)形成冰晶，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)、核酸完整性。這是導(dǎo)致樣本活性下降、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)偏差的主要原因之一。解決方案：遵循“梯度凍存、快速復(fù)蘇”原則。凍存時(shí)，先將樣本放入4℃冰箱預(yù)冷30分鐘，再轉(zhuǎn)入-20℃冰箱2小時(shí)，最后放入-80℃冰箱過夜或轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期儲(chǔ)存；復(fù)蘇時(shí)，將凍存管快速放入37℃恒溫水浴鍋，不斷搖晃至樣本全融化（一般1-2分鐘），避免樣本長(zhǎng)時(shí)間處于低溫或高溫環(huán)境。

 

　　誤區(qū)五：儲(chǔ)存與取用混亂，造成樣本混淆或損壞。未做清晰標(biāo)識(shí)、隨意堆疊凍存管，取用時(shí)分不清樣本信息；或從液氮中取出后直接開蓋，溫差過大導(dǎo)致管內(nèi)壓力驟變，樣本噴濺。解決方案：凍存管外貼耐低溫標(biāo)簽，標(biāo)注樣本名稱、濃度、凍存日期等關(guān)鍵信息，必要時(shí)進(jìn)行雙重標(biāo)識(shí)（管身+管蓋）；儲(chǔ)存時(shí)采用凍存盒分類擺放，避免擠壓碰撞；取用液氮中儲(chǔ)存的凍存管時(shí)，佩戴防護(hù)手套和護(hù)目鏡，先將它取出置于過渡容器中，待溫度回升至-20℃左右再開蓋，防止壓力驟變引發(fā)危險(xiǎn)。

 

　　凍存管的規(guī)范使用是生物樣本儲(chǔ)存的基礎(chǔ)，每一個(gè)操作細(xì)節(jié)都關(guān)乎樣本質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)安全。規(guī)避上述五大誤區(qū)，嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，才能最大限度保留樣本活性，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。科研工作者和樣本管理人員需提高重視，將規(guī)范操作融入每一個(gè)環(huán)節(jié)，為實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用筑牢樣本安全防線。